Nous avons demandé à nos consultants en maladies respiratoires et en endoscopie de nous donner quelques conseils essentiels pour la préparation correcte des échantillons cytologiques du lavage broncho-alvéolaire (LBA). Comme pour les autres cytologies la qualité de l’échantillon est essentielle pour obtenir des informations diagnostiques utiles. Malheureusement, les échantillons cytologiques du LBA sont de mauvaise qualité si certaines règles fondamentales ne sont pas strictement respectées.
Les voici résumées:

1) Comme pour tous les échantillons dans lesquels les cellules sont en suspension dans un liquide, dans la préparation de la cytologie à partir du LBA, la préparation de l’échantillon doit être aussi rapide que possible, et il est préférable de ne pas retarder la préparation de plus d’une heure après le prélèvement. Pour cette raison, il est évident que les frottis cytologiques doivent être préparés par le clinicien et non au laboratoire, si l’on ne veut pas risquer d’obtenir des résultats insatisfaisants.

2) Si l’on veut effectuer un examen de culture à partir du matériel prélevé, la première chose à faire est de prélever 2 ml de liquide et de mucus dans une seringue stérile qui sera conservée au réfrigérateur jusqu’au moment de l’envoi; le matériel prélevé doit être conservé au réfrigérateur jusqu’au moment de l’envoi, le matériel collecté ne doit pas avoir été en contact avec de l’EDTA, car l’anticoagulant a des propriétés bactériostatiques et pourrait être responsable de faux négatifs. Le matériel destiné à la culture doit idéalement parvenir au laboratoire dans les 24 heures suivant le prélèvement ou être mis sur un milieu de culture qui peut prolonger la durée de conservation de l’échantillon.

3) Si le tube dans lequel le liquide de lavage a été prélevé contient du matériel floculé, celui-ci doit être prélevé à l’aide d’une pipette ou d’une aiguille de seringue et placé sur une lame, puis écrasé avec une autre lame de façon à obtenir deux échantillons cytologiques qui doivent être séchés rapidement (par exemple à l’aide d’un sèche-cheveux ou d’un radiateur), sous peine d’en altérer la qualité en raison des phénomènes de coarctation cellulaire.

4) A partir du composant liquide, il convient de réaliser des frottis directs en recueillant une goutte de liquide à l’aide d’une pipette comme on le ferait pour un frottis sanguin. Ces échantillons ne sont pas très utiles pour l’interprétation cytologique car ils ont tendance à être hypocellulaires, mais ils peuvent donner une idée approximative de la cellularité de l’échantillon.

5) Pour l’interprétation cytologique, il est essentiel de concentrer les cellules ; la technique la plus simple consiste à centrifuger 5 ml (ou la totalité de la quantité prélevée si l’aliquote est plus petite) pendant 10 minutes à faible vitesse. Jeter ensuite tout le surnageant, à l’exception d’une petite quantité de sédiment, et procéder à la remise en suspension du culot cellulaire recueilli au fond du tube en l’agitant pendant quelques secondes.

6) Prélever une goutte du matériel préparé et préparer au moins 2 lames de frottis comme décrit au point 4); là encore, il est conseillé de sécher rapidement les échantillons, éventuellement à l’aide d’une source d’air chaud.

7) N’oubliez pas de préciser clairement quels sont les échantillons préparés par frottis direct et quels sont ceux préparés après centrifugation, en l’indiquant clairement sur la lame de manière indélébile.

A ce stade, les échantillons peuvent être envoyés au laboratoire pour une coloration de routine, sans précautions particulières. Pensez simplement à les protéger de manière appropriée pour éviter qu’ils ne se cassent et, surtout il est important de ne pas les envoyer avec les échantillons destinés à l’histologie (c’est-à-dire dans la même boîte contenant des bocaux de formol), ce qui rendrait la cytologie presque illisible en raison du dépôt de formol.

échantillon de bonne qualité
Exemple d’un échantillon de bonne qualité : les cellules semblent bien conservées et il est facile d’effectuer même une numération différentielle
échantillon de mauvaise qualité
Exemple d’un échantillon de mauvaise qualité, de faible valeur diagnostique : les cellules apparaissent grossières ou endommagées et il n’est pas facile d’effectuer un comptage différentiel.
Par Enrico Bottero et Davide De Lorenzi