L’examen cytologique est une méthode de diagnostic très courante en médecine vétérinaire: rapide, facile à réaliser et peu coûteuse. Il peut apporter des informations diagnostiques dans de nombreuses disciplines cliniques (dermatologie, oncologie, médecine interne, etc.).

Le cytologiste, appelé à assister le clinicien dans la résolution du cas clinique, se retrouve à devoir opérer en interprétant les préparations dans un monde de lumières et de couleurs qui prennent magiquement forme dans les yeux experts du lecteur.

L’un des aspects les plus frustrants, tant pour le cytologiste que pour le vétérinaire référent, est l’obtention de résultats non diagnostiques, en particulier lorsque le matériel soumis est de mauvaise qualité ou non représentatif de la lésion échantillonnée, en raison du mauvais choix et de la mauvaise exécution de la méthode d’échantillonnage. Il en résulte également une frustration de la part du client qui a payé pour le test sans avoir obtenu d’indications utiles pour la gestion du problème dont souffre son animal.

Afin d’optimiser l’échantillonnage cytologique, il existe certaines règles à suivre et des conseils qui, lorsqu’ils sont respectés, peuvent réduire considérablement le pourcentage d’échantillons « acellulaires ou non concluants ».

Dans cette interview, le Dr Walter Bertazzolo, directeur scientifique du laboratoire Mylav, propose 10 règles pour un bon prélèvement cytologique.

  • Bonjour Walter, pour commencer, quelle est la règle la plus importante en cytologie diagnostique?

    Règle n° 1: Le clinicien est plus important que le cytologiste.

    Pour obtenir un bon résultat, la personne qui prélève l’échantillon est bien plus importante que celle qui l’examine au microscope! En effet, un échantillon de mauvaise qualité sera toujours non concluant, même s’il est envoyé au meilleur cytopathologiste du monde.

  • D’accord, mais si je suis clinicien et que je dois décider de prélever ou non un échantillon cytologique sur une néoformation ou un organe, comment savoir si cela vaut la peine ou si un examen histologique est plus approprié?

    Règle n° 2: Nous essayons d’utiliser la logique et notre tête avant de procéder avec nos mains.

    En présence de néoformations, il est toujours conseillé de procéder d’abord à un prélèvement cytologique car il est moins invasif, peu coûteux et a un temps de réponse plus rapide. Cependant, dans de nombreuses pathologies organiques, la cytologie peut ne pas être très indicative et une biopsie histologique est nécessaire pour obtenir le diagnostic. Les échantillons cytologiques prélevés sur le foie et les reins chez les patients suspectés d’hépatopathie et/ou de néphropathie en sont un exemple : très souvent, ils ne fournissent aucune information utile au clinicien. En cas de doute, il est conseillé de demander l’avis du laboratoire avant de s’aventurer dans des procédures qui peuvent s’avérer inutiles, invasives et dont les résultats sont incertains.

  • Le prélèvement cytologique peut être réalisé par différentes techniques (FNA = aspiration à l’aiguille fine, apposition, brossage, etc…). Laquelle de ces techniques est préférable?

    Règle n° 3: Il n’existe pas de méthode d’échantillonnage infaillible et parfaite.

    Là encore, il n’y a pas de réponse unique, car tout dépend de ce que nous devons prélever. Lorsqu’il s’agit d’analyser une néoformation nodulaire ou un organe qui « donne » facilement des cellules (ganglion lymphatique, foie, tissu glandulaire, etc.), le prélèvement à l’aiguille fine est certainement à privilégier. L’apposition est réservée aux lésions ulcérées ou aux surfaces coupées d’un tissu à analyser, en prenant soin d’éliminer l’excès de sang et les débris de surface, inutiles au diagnostic. Le brossage et le grattage sont presque toujours à éviter car ils ne recueillent que du matériel superficiel ; ils peuvent être utiles pour l’analyse de la partie superficielle d’une muqueuse (nasale par exemple). Enfin, pour les préparations de biopsies endoscopiques, il est conseillé d’effectuer un squash-prep, qui consiste à écraser vigoureusement un fragment de tissu entre deux lames.

  • Supposons que j’ai décidé de procéder à un prélèvement cytologique et que je prélève du matériel sur un tissu. Que dois-je faire pour préparer un frottis de qualité?

    Règle 4: Toujours obtenir une « monocouche » de cellules.

    Pour pouvoir analyser les cellules, celles-ci doivent être disposées sur la lame en couche mince (monocouche), car les colorants rapides de type Romanowsky utilisés en clinique nécessitent une couche mince de cellules pour permettre aux colorants de pénétrer dans celles-ci. Pour ce faire, on étale délicatement le matériel prélevé entre deux lames de verre, en profitant de la pression exercée par les deux lames et en veillant à ne pas exercer une force excessive, qui endommagerait les cellules et, par conséquent, affecterait la lecture de la préparation.

  • Et après le frottis, que faire de la lame?

    Règle n° 5: Fixer l’échantillon immédiatement.

    Cette étape est généralement la plus négligée par les cliniciens, mais c’est peut-être la plus importante. Pour permettre une bonne coloration de la lame, les cellules, une fois maculées, doivent être séchées à l’air, par exemple en secouant rapidement la lame. Les sprays fixateurs chimiques ne doivent jamais être utilisés (sauf dans de rares cas exceptionnels et pour des colorations particulières telles que le Papanicolau ou l’hématoxyline-éosine).

    Le processus de fixation rapide à l’air est particulièrement important pour les échantillons cytologiques composés de liquides ou contenant beaucoup de sang (par exemple, liquide synovial, épanchements, moelle osseuse, etc.), pour lesquels un séchage trop lent est une cause quasi certaine d’échec. Dans ces cas, il est utile d’utiliser une source de chaleur (par exemple un sèche-cheveux) pour fixer rapidement l’échantillon. Les échantillons doivent toujours être bien séchés avant d’être placés dans les boîtes de lames qui seront envoyées au laboratoire.

  • Parfait, à ce stade, l’échantillon doit-il être analysé immédiatement ou peut-il être conservé? Par ailleurs, quelles sont les précautions à prendre lors de l’envoi des lames au laboratoire?

    Règle n° 6: Les préparations cytologiques sont résistantes, mais pas à tout !

    S’ils sont conservés dans un endroit sec et à l’abri de la poussière, les frottis peuvent être conservés pendant plusieurs jours, voire plusieurs semaines. Cependant, certaines erreurs courantes doivent être évitées: avant la coloration finale, il faut éviter de mouiller les lames, car les cellules se détacheraient de la lame; un aspect très négligé, et la cause de fréquents échantillons « ininterprétables », est d’utiliser des lames stockées dans la clinique à proximité du formol ou, plus communément, d’envoyer des échantillons cytologiques et histologiques au laboratoire dans le même emballage. Le formol est une substance très volatile et, même si les pots sont hermétiquement fermés, ses vapeurs s’échappent et, une fois en contact avec les cellules ou les lames, ne permettent pas aux colorants de pénétrer de manière optimale, rendant ainsi les échantillons ininterprétables.

  • Mais combien d’échantillons dois-je prélever pour avoir plus de chances d’obtenir une préparation diagnostique?

    Règle 7: Plus vous prélevez d’échantillons, plus vous avez de chances d’obtenir un diagnostic.

    Bien entendu, de nombreuses autres variables doivent être prises en compte dans ce cas : la coopération du patient, la douleur du site de prélèvement, le risque de complications en cas de ponctions multiples, etc. Dans tous les cas, il est conseillé d’envoyer toutes les lames préparées, même celles qui semblent macroscopiquement peu cellulaires.

  • Dois-je toujours envoyer tout le matériel non coloré ou puis-je commencer à vérifier mes résultats d’échantillonnage dès la clinique ambulatoire?

    Règle 8: Apprenez de vos erreurs (ou de celles des autres).

    Pour éviter d’envoyer des échantillons non diagnostiques, il peut être pratique de colorer une ou plusieurs lames et d’évaluer la présence ou non de matériel significatif et, s’il y a des cellules, de soumettre les échantillons au laboratoire. Si les échantillons sont acellulaires, on peut essayer de prélever un nouvel échantillon de la lésion ou envisager un examen histopathologique.

    Avec un minimum d’expérience au microscope, et sans nécessairement être un cytologiste expérimenté, cette procédure nous aide à améliorer et à comprendre à la fois quand un échantillon n’est pas cellulaire ou représentatif de la lésion et quelle est la raison de l’échec. Vous devriez également envoyer les lames qui ont été colorées en tant que « vérification de l’adéquation » afin d’éviter le risque que la seule lame diagnostique soit celle que vous avez vérifiée.

  • Et si mon taux d’échec est de toute façon trop élevé, que pourrais-je faire pour améliorer ma technique d’échantillonnage?

    Règle n° 9: Adressez-vous toujours à des collègues plus expérimentés que vous.

    N’hésitez pas à contacter les Experts de Mylav, qui pourront vous donner des conseils utiles au cas par cas.

  • Et si, malgré toutes ces astuces, vous ne parvenez pas à obtenir le matériel adéquat?

    Règle 10: il reste toujours la biopsie histologique.

    Si la cytologie n’est pas diagnostique, n’est pas réalisable ou est inutile dans ce cas précis, il reste toujours la possibilité de recourir à un prélèvement histologique, qui est toujours « le gold standard ».

Merci Walter pour vos précieux conseils!